PUBLICATION ON MICROBIOLOGY

• Document Type: CREST
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• Release Decision: RIPPUB
• Original Classification: C
• Document Page Count: 138
• Document Creation Date: December 22, 2016
• Document Release Date: May 4, 2010
• Sequence Number: 1
• Publication Date: March 31, 1958
• Content Type: REPORT

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COUNTRY Hungary
SUBJECT Publication on Microbiology
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DATE ACQ.
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ACTX
MICROBIOLOGICA
ACADEMIAE SCIENTIARUM
HUNGARICAE
ADIUVANTIBUS
E. FARKAS, J. HORVATH, S. KOTLAN, R. MANNINGER,
A. PELC, K. RAUSS, J. SZIRMAI
REDIGIT
G. IVANOVICS
TOMUS IV FASCICULUS 3
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ACTA MICROBIOLOGICA
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MIKROBIOL6GIAI KOZLEMENYEI
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mikrobiolLgia targykorebol.
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ACTIVE AND PASSIVE MOUSE PROTECTION TESTS
USED IN THE ASSAY OF TYPHOID VACCINES
By
G. TOLNAI and G. BARSY
State Institute of Hygiene, Budapest
(Received May 7, 1956)
There is no general agreement in the literature concerning the experimental
models and evaluation of active and passive mouse protection tests used in the
assay of typhoid vaccines. In the present work we have made a revision of the
known experimental models of active mouse protection tests and an attempt
was also performed to improve the passive mouse protection test by using a
standard serum.
Challenge of mice. Ty, strain was used throughout. With the FELIX method [4] a 6-hour
old culture grown on HAWTLEY agar was suspended in RiNCER's solution and was used in 0,5 ml
volumes. The bacterial count of the challenge dose in the different groups (Tables I and II)
increased in geometrical progression. With the mucin method, standard lyophilized culture of
the Tys strain was used. One of the ampoules containing the lyophilized culture was opened
6 hours before use and the content was suspended in 5,0 ml peptone water, as recommended
by RAUSS [14]. After incubation at 37? C for 6 hours dilutions were made of the culture and the
dilution chosen for infection was mixed well with 5 per cent WILSON granular mucin. According
to earlier experiments [22], the results obtained by the mucin method were comparable to those
obtained without the use of mucin.
Experimental animals. In general, albino mice from a home stock were used. Occasionally
for comparison fawn-coloured mice from a home stock and strains B and M obtained from the
Phylaxia State Institute for Vaccine Production were also used.
Immunization. Vaccines AD and AD, were adsorbed bacillary vaccines, bearing the pro-
duction No. 20 and 21, respectively [20].
The standard vaccine was prepared from Ty' bacteria grown in the dialyzed medium
of DOLE [3], as modified by us [21]. It was centrifuged under aseptic conditions, killed and dried
with acetone, making 15 g powder at a time. The dried bacteria were stored at room tempera-
ture and were suspended immediately before use, in the desired concentration. On analytical
scales, 125 mg bacterial powder was weighed, homogenized in physiological saline in an achate
mortar and suspended in 50 ml-volume to yield approximately 10 000 million germs per ml [10].
The tenfold dilution of this suspension (made by means of a calibrated pipette) represented
the standard vaccine.
The standard serum was a mixture of sera from patients convalescing after typhoid fever.
The sera were kindly supplied by the Central Hospital for Infectious Diseases, Budapest:
In 1954 30, and in 1955 50 such samples were obtained ; equal volumes of each sample were
mixed. They were Seitz-filtered and lyophilized in 1,2 ml volumes per ampoule. Approximately
100 ampoules were obtained in this way. This standard serum was matched with the ?Provisional
International Standard" obtained in the lyophilized form from WHO.
Immunization was made invariably through the subcutaneous, and infection through
the intraperitoneal route. In the passive protection test intraperitoneal immunization was
employed. The post-infection observation period was 48 hours. Blood from at least two dead
animals from each group was obtained by heart puncture and cultured to prove the specificity
of the cause of death.
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Statistical analysis. Except for sex, the animals were selected at random, making use of
the table described by FISHER and YATES [7]. LD50 was calculated according to REED and
MUENCH [18]. (Potency ratios were calculated by probit analysis.)
Experimental
Active mouse protection test
This test is commonly used in the assay of typhoid vaccines. There is,
however, no international agreement concerning the theoretical aspects of the
test, or the technique of immunization and infection. The models of the active
mouse protection tests may, in general, be classified into two main groups.
a) The test animal is immunized with a single fixed dose and is infected
with increasing doses.
b) Immunization is carried out with graded doses of the vaccine and
the challenge dose is the single, fixed one.
Of the two methods, that described under a) is the older and more exten-
sively used one. The procedure has been accepted, e. g., by the Civil Health
Administration of the USA [13], by the Soviet Union, Czechoslovakia and Hun-
gary. Theoretically, the test is based on the consideration that the protective
value of the vaccine is determined by the magnitude of the danger against
which it affords protection. Attempts have been made to express this kind of
protective value quantitatively. For example, LovRExovicx and RAUSS [11]
introduced in 1942 the concept of mouse units in the titration of vaccines. One
mouse unit is the smallest amount of the extract capable of protecting a mouse
weighing 18 to 20 g against the lethal action of an adequate dose (lethal dose)
of Ty, bacteria. Recently, a similar unit called typhoid immunity unit (TIU)
has been introduced by LUIPPOLD [12].
Earlier, the method described under a) was difficult to carry out, because
the preparation of the infective suspension was a rather delicate task. Excessive
number of bacteria had to be used to achieve deaths among test animals less
susceptible to typhoid and the margin between the ineffective dose and that
causing 100 per cent mortality was always very narrow. Moreover, the suscept-
ibility of test animals showed seasonal changes. For this reason, the technique
of infection demanded utmost precision and attention and even then failure
was not inevitable, either because all the test animals died or because no evalu-
able mortality occurred in any of the groups. In such cases the entire procedure
had of course to be repeated. The introduction of the mucin technique [13]
has brought considerable improvement. The mucin technique [19], and its use
in Hungary [14, 20, 22] have been dealt with in the literature.
The method involving immunization with a single fixed dose and infection
with graded doses has been studied by using vaccines of known potency. Vaccine
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AD was tested in two parallel experiments, comparing at first half, and then
quarter of the original concentration. The results are shown in Tables I and II.
In both cases immunization with the fixed dose and challenge with an increasing
number of bacteria indicated that the /2 and 1/4 concentrations were less potent
than the original. A comparison of the LD50 values does not, however, permit
even an approximate estimation of the true difference between the %2 and 1/4
concentrations. This phenomenon has been ascribed to the fact that the relation
between the amount of antigen injected and the immune response attainable
exists only within certain limits. Beyond these the increase of the amount of
antigen injected is not any more accompanied by a proportionate increase in
the immune response, which might even decrease, as we, too, have observed
it [20]. Thus, overdosage of the vaccine is a source of error distorting the result
of comparison always in favour of the vaccine of poorer quality. This is the ex-
planation of the failure of the experiments shown in Tables I and II. In order
to eliminate the above source of error, it is common practice to employ lower
concentrations for inducing immunity in similar tests [1, 23]. However, when
vaccines of unknown potency are used it is not possible to foretell which dose of
the vaccine will exceed the smallest amount inducing maximum immunity.
It has been also shown by our parallel experiments that unreliable infor-
mation can only be obtained by expressing the protective value of the test
vaccine in terms of the hazard averted by it. It may suffice in this respect to
analyse the results obtained for the original concentration of vaccine AD. In
the earlier experiment this vaccine had been found to be capable of protecting
The protective value of typhoid vaccine AD and of its 1/2 dilution
Method : Immunization with one dose, graded infection.
Inoculation : 0,5 ml to each mouse.
Infection : 4 weeks following immunization.
Number of bacteria
in challenge dose,
millions
Mortality in groups
of 25 nice each
AD I AD/2
50
75
112,5
168,75
Control LD50 (million bacteria)
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The protective value of the typhoid vaccine AD and of its 1/4 dilution
Method : Single immunizing dose, graded infection.
Inoculation : 0,5 ml into each mouse.
Infection : 4 weeks after immunization.
Number of bacteria
in challenge dose,
millions
50
75
112,5
168,75
Mortality in groups
of 22 mice each
50 per cent of the immunized mice against 125,4 million bacteria in the challenge
dose at the same time, the LD50 for control mice was 26,7 million germs.
The ratio between these two LD50values was approximately 1 to 5.One week
later the same vaccine afforded 50 per cent protection against 120,6 million
bacteria in the challenge dose as compared to the LD50 value of 15,9 million
germs for the controls: this time the LD50 (immunized) to LD50 (non-immunized)
ratio was 1 to 8.
Thus, the results were divergent within such short a period, in spite of
the fact that the conditions of both experiments were identical. It is obvious
that by decreasing the amount of antigen injected, as well as by the use of the
mucin technique the above results could be improved. However, one feels reluc-
tant to accept the view that for example the TIU suggested by LUIPPOLD would
be of any practical significance.
In 1949, BATSON [1], presenting convincing experimental and statistical
evidence, proved the superiority of immunization with variable doses and
infection with a single fixed dose to the aforementioned method. According
to his final conclusion, in the mouse protection tests of typhoid vaccines graded
immunization, and infection with a fixed dose proved to be superior to the
method of immunization with a fixed dose, and infection by graded doses. With
the former method minor changes in dose yielded more significant differences,
the slope of the dose-response curve was steeper and the 50 per cent point could
be determined more accurately ; moreover, sex had less influence on the results.
On the basis of the investigations of BATSON et. al [2], the US Army Health
Service has adopted the graded immunization-fixed dose infection method in
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active mouse protection tests for the assay of typhoid vaccines. KOHLER, of
Switzerland [9], and GRABAR and LE MINOR, of The Pasteur Institute of Paris
[8], use similar procedures.
The reversed gradation is not the only difference between the two methods.
With the first method the principal trend of thought in the experiments is that
the protective value of the test vaccine is related to the hazard against which
it affords protection. On the other hand, the other method is not intended to
yield any absolute value ; it expresses the protective value of the test vaccine
in relation to a vaccine of known potency, which thus plays the role of a refer.
ence standard. The proper choice of the reference standard, and the mainte-
nance of its constant potency are the factors of fundamental importance in this
method. We used acetone-killed and powdered Tye organisms for preparing the
standard vaccine, taking care that the conditions of preparation be always
identical. So far, our standard has met the requirements ; it was highly effective
and the preparations made at different times proved to possess constant activity.
Under our working conditions tests on adsorbed vaccines involved specific
problems. Our standard is a simple bacillary vaccine. The mice injected with
it reach the peak of immunity one week after inoculation and maintain that
for one week. The immune response to adsorbed vaccines develops slower, reach-
ing the peak in mice in about four weeks. For this reason, immunization with
the standard was carried out two weeks after immunization with the adsorbed
vaccine, while infection was carried out simultaneously.
In Table III are shown the survival rates for mice immunized with dif-
ferent dilutions of the standard, AD, and AD/2 vaccines, the latter being the
%2 dilution of the AD vaccine. In all three cases four immunizing doses were
given. As it can be seen, the increase in the amount of antigen injected went
parallel with the increase of survival rate of mice in all three groups. The potency
ratios indicate that the potency of the adsorbed vaccine is superior to that of
the bacillary vaccine, and offer useful information concerning the relative poten-
cies of the two test vaccines. As related to the standard vaccine, the concentrated
vaccine had a potency of 320 per cent, the 1/2 dilution of it 168 per cent. An even
more precise method is to compare the value of the original concentration with
that of the %2 concentration. The 1/2 diluted vaccine possessed 50,3 per cent of
the activity of the original concentration. This high degree of accuracy is natu-
rally also a result of chance; however, the limits of error shown alongside the
potency ratios suggest that satisfactory results may be obtained even under
less favourable conditions.
In Table IV are shown the results for the experiment carried out one week
later. The same vaccine was used as in the earlier experiment, except that it
was diluted 1 to 4, instead of the former 1 to 2. The original concentration was
found to have an activity of 309 per cent, as related to that of the standard,
almost the same value had been obtained one week earlier. The activity of the
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Potency of vaccine AD and of its 1/2 dilution
Method : graded immunization, single infecting dose.
Standard : Tye vaccine.
Infection : AD and AD/2 4 weeks after immunization.
Standard 2 weeks after immunization.
Infective dose : 10-4 dilution of a 6-hour peptone-water ampoule culture.
Control LD50 10_s dilution.
1160
180
140
120
110
Standard ..............
AD ...................
AD/2 ..................
AD ....................
AD/2 ..................
Number of survivors in groups
of 16 mice each
Relative
potency
100
320
168
100
50,3
Fiducial limits
W
203 - 597
103 - 340
1/4 dilution, as related to that of the standard, was 76 per cent, i. e. almost 1/4
of the 309 per cent value. The activity of the 1/4 dilution, as expressed in percent-
age of the activity of the original concentration, was 27 per cent instead of
the 25 per cent expected, with very narrow limits of error.
The graded immunization-fixed dose infection method, as well as the use
of the standard vaccine yielded excellent results in our experiments. The results
were reproducible and the true differences in protective value existing between
the test vaccines could be shown with a high degree of accuracy. The other
method (that involving immunization with a fixed dose and graded infection)
yielded no reproducible results and it could only indicate that the activity of
the original concentration differed from that of the A2 and 1/1 dilutions, but
made no quantitative evaluation possible.
The success of the titration method greatly depends upon the quality
and care of the experimental animals. For this reason the experimental animals
were kept under carefully controlled conditions. In a series of experiments we
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Potency of vaccine AD and of its 1/4 dilution
Method : graded immunization, single-dose infection.
Standard : Tye vaccine.
Infection : AD and AD/4: 4 weeks following immunization.
Standard : 2 weeks following immunization.
Infective dose : 5 ? 10-3 dilution of a 6-hour peptone-water ampoule culture.
Control LD50 10-e dilution.
1 : 160
1: 80
1:40
1:20
1:10
1:5
Number of survivors in groups
of 25 mice each
St AD
Standard .............
AD ...................
AD14 .................
AD ..... :.............
AD/4 ................
Relative
potency
(%1
100
309
76
100
27
Fiducial limits
1%1
190 - 589
50 - 131
could observe the different behaviour of the different strains of mice. In this
series 3 strains of mice were used, the Phylaxia strains B and N and the home
strain D. Groups of each strain were inoculated with the standard vaccine and
with the vaccine ADl, respectively. Vaccine AD, originated from production
series other than the adsorbed vaccine used in the previous tests. In this series
the immunogenic capacity of the adsorbed vaccine was determined after 2 weeks,
as we did with the standard vaccines instead of after 4 weeks. The results are
shown in Table V. The potency ratios were this time lower because of the shorter
immunization period of the adsorbed vaccine. It is remarkable that, although
different results were obtained for the different groups of mice, each potency
ratio proved to fall within the limits of error determined in the other two cases.
The limits of error varied highly from strain to strain. From this it obviously
follows that the tests should always be carried out on the same strain.
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The potency of vaccine AD, in different strains of mouse
Method : graded immunization, single-dose infection.
Standard : Tye vaccine.
Infection : 2 weeks after immunization.
Infecting dose : 10-4 dilution of a 6-hour peptone-water ampoule culture.
Control LD50 10-8 dilution.
Mouse strain Vaccine
St
AD1
St
AD1
St
AD1
relative otency fiducial limits
%
%
Number of survivors in groups
of 16 mice each,
per dilution of vaccine
1 160 'i- 1:80
Potency of vaccine AD,
in percentage of the standard
187
207
254
126-286
122-444
149-530
Passive mouse protection test
Similar to the practice in foreign countries, after having n}ade the
laboratory assay tests, our Institute estimates the potency and the reactivity
of a vaccine in small groups of human subjects.
The potency test is based on the generally accepted assumption that the
potency of typhoid vaccines is proportionate to the concentration of mouse-
protecting antibodies in the serum of inoculated persons [10, 14, 15].
RAUSS [16] carries out the passive mouse protection test with sera from
inoculated persons for the assay of dysentery vaccines in the following way.
From persons immunized with a fixed dose, blood is taken both before and after
inoculation. Mice are immunized intraperitoneally with 0,1 ml of the pre-inocu-
lation, and with 0,01 ml of the post-inoculation sera, respectively ; then in
both groups of mice the LD50 is determined by challenging the mice by differ-
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eat number of bacteria. From the ratio of the two LD50 values, the protective
index is calculated.
This method has been adopted by the Vaccine Control Depaitinent of our
Institute for the estimation of mouse-protecting antibody appearing after the
use of typhoid vaccines.
In an earlier work [20] the protective values of different serum mixtures
were compared. We modified the above method as follows : the groups of mice
immunized with different dilutions of the two kinds of serum mixture were chal-
lenged with equal number of bacteria and thus the protective values could be
compared directly. Based on the results it was suggested that in the mouse-
protection tests the fixed-dose immunization and graded infection method might
be employed instead of the graded immunization and fixed-dose infection.
The value of this experimental model could also be enhanced considerably
by using a standard reference serum for comparison. We have obtained 5,0 ml
of the "Provisional International Standard" of the WHO [5].
For routine purposes, however, we have prepared a home standard from
pooled human convalescent sera as described in the methodical section. Accord-
ing to RAuss [17] such sera have a high protective value. We suppose moreover
that when human sera are to be tested human reference sera may be more con-
venient than horse sera.
Comparison of the protective value of the provisional international standard serum
and of the serum mixture recommended as home standard
Survival rates for groups of 12 mice each.
Method : graded immunization, single-dose infection.
Infecting dose : 10-e dilution cf a 6-hour peptone-water ampoule culture.
Control LD50 5 ? 10-9 dilution.
International provisional
standard
Dose of serum
Num
ber of
Dose of serum I Number of
10-t ml
sur
vivors
10-1 ml survivors
0,0625
0,03125
1
0,125
0,0625
2
0,25
0,125
3
0,5
0,25
4
1
0,5
10
Relative potency
(%)
Fiducial limits
I P St
H St
100
2,12
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The protective value of convalescent sera may offer a satisfactory means
of comparison for judging the potency of the vaccine it being obvious that
one cannot require the vaccine to produce an immunity higher in degree than
the protective value of the convalescent serum. Our own standard has been
compared with the international standard for potency. The results are presented
in Table VI. According to the analysis, the convalescent serum represented about
1/50 of the protective value of the international standard. Though the stability
of our home standard has proved to be satisfactory, it is advisable to repeat
this comparative test at intervals.
Summary
Two models of the active mouse protection test employed in the assay of typhoid vaccines
have been subjected to study. The method involving immunization with a fixed dose and infection
by graded doses can be criticized for the following reasons.
1. A fixed dose may be easily overdosed, resulting in a distortion of the results of assay
in favour of vaccines of poorer quality, i. e. the method does not truly indicate the differences
in protective value existing between the vaccines.
2. The method fails to express the protective value of the vaccine in terms of the hazard
averted. Highly variable results have been obtained for the same vaccine in tests made at short
intervals.
Immunization by graded doses and infection by a fixed dose, with the simultaneous intro-
duction of a standard vaccine indicated reliably and within remarkably narrow limits of error
the true measure of the difference in the protective value of different vaccines, on the one hand,
and yielded reproducible results, on the other.
The latter method is recommended for use in passive mouse protection tests, with pooled
sera from patients convalescent from typhoid as the standard.
Acknowledgements. The authors are indebted to DR. L. ERD6S for his valuable advices
DR. P. FERENCZ for permission to obtain blood from convalescent patients, and to J. KLUG
for expert technical assistance.
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UNTERSUCHUNGEN VBER DAS VORKOMMEN
DER TOXOPLASMOSE AN HAUSTIEREN IN UNGARN
Von
A. KARDEVAN and P. KAPP
Institut fiir Pathologische Anatomie der Veterindrmedizinischen Hochschule, Budapest
(Eingegangen am 18. Juli 1956)
Auf die Verbreitung der Toxoplasmose in Ungarn sind unsere Haustiere
noch nicht eingehend untersucht worden. In einer 1952 veroffentlichten Abhand-
lung hatten wir bereits mitgeteilt, daB wir in Ausstrichpraparaten aus der Milz
and Lunge eines verendeten Feldhasen Toxoplasmen nachweisen konnten, deren
Zuchtung aber damals nicht gelang. In der ungarischen humanmedizinischen
Literatur sind mehrere auf das Vorkommen der Toxoplasmose deutende Mittei-
lungen erschienen (FOCHER, 1951 ; LEICHNER and SZEPES, 1951 ; CSERMELY,
1953; ZOLTAI and CSABA, 1953 ; WEINSTEIN, 1954). AuBer CSERMELY hatten
jedoch die einheimischen Autoren auf das Vorliegen der Toxoplasmose lediglich
aus der klinischen Untersuchung geschlossen.
Die wenigen ungarischen Angaben sowie die Erfahrung, daB die Quelle
der menschlichen Infektionen in der Tierwelt zu suchen ist, liefen es notig erschei-
nen, die Verbreitung der Toxoplasmose bei unseren Haustieren zu untersuchen.
Im Hinblick darauf, dal der Hund im Zusammenhang mit der menschlichen
Infektion an erster Stelle steht, nahmen wir unsere Untersuchungen zum Nach-
weis des Vorkommens der Toxoplasmose in Ungarn in erster Linie an Hunden
vor, zumal die Mehrzahl der GroBstadtmenschen zu dieser Tierart in der engsten
Beziehung steht.
Unsere Untersuchungen lassen sich in drei Abschnitte einteilen. Im ersten
Abschnitt berichten wir fiber unsere systematisehen Untersuchungen an den mit
der Diagnose Hundestaupe zur Sektion gelangten, im Leben neurale Symptome
aufweisenden Hunden zwecks Nachweis der Toxoplasmose, im zweiten Abschnitt
fiber die anlaBlich unserer Routineuntersuchungen an einer Katze and einem
Kaninchen festgestellten Toxoplasmose and im dritten Abschnitt fiber die Ziich-
tung eines Toxoplasma-Stammes aus dem erwahnten Kaninchen.
1.
Bei 'Beginn der histologischen Untersuchungen zum Nachweis der Toxo-
plasma bei Hunden schien es im Hinblick auf die Ahnlichkeit des Krankheits-
bildes mit dem der Hundestaupe am zweckmaBigsten, Hunde zu untersuchen,
die unter hundestaupeartigen Symptomen zugrunde gegangen waren. Jedoch
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mit Riicksich.t darauf, daB es praktisch sehr schwierig gewesen ware, von den
an Hundestaupe eingegangenen verhaltnismal3ig zahlreichen Hundekadavern
jeweils mehrere Organe eingehend histologisch zu untersuchen, nahmen wir die
Untersuchungen auf Toxoplasmose lediglich an den Kadavern der Runde vor,
die unter neuralen Symptomen zugrunde gegangen waren. Im vergangenen and
gegenwartigen Jahr wurden im Laufe von 8 Monaten die Kadaver von 20 Hun-
den untersucht, deren klinische Diagnose Enzephalitis bzw. Enzephalomyelitis
war. Nach der pathologisch-anatomischen Untersuchung der Tiere nahmen wir
in erster Linie aus dem Zentralnervensystem, von einigen Ausnahmen abgesehen
aber auch aus anderen Organen, pathohistologische Untersuchungen vor. Bei
2 der 20 Hundekadaver vermochten wir mit der pathohistologischen Untersu-
chung durch Toxoplasma verursachte mehr oder minder schwere Enzephalitis
festzustellen. Der pathohistologische and pathologisch-anatomische Befund der
beiden Mille sei nachfolgend mitgeteilt.
Fall Nr. 1
Kadaver einer 6 Monate alten, braunen irischen Setter-Hiindin aus dem
Besitz des Budapester Einwohners K. Gy. Klinische Diagnose : Febris catar-
rhalis nervosa infectiosa canis.
Sektionsbefund : MaBige Abmagerung. Die Bindehaut ist gerotet, mit wenig
schleimig-eitrigem Sekret bedeckt. An den Sohlenpolstern and am Nasenspiegel
ist die Hornschicht verdickt (3-5 mm dick), hart, stellenweise riBig. Die Dunn-
darmschleimhaut ist leicht gerotet and vaskular injiziert. In der Rindensubstanz
einer Niere ist ein bohnengroBer, grauweiBer, speckglanzender Herd sichtbar.
An den anderen intraabdominalen sowie intrathorakalen Organen sind keine
pathologischen Veranderungen wahrnehmbar. Die BlutgefaBe der Hirnhaute
sind erweitert, sonst sind an der Oberflache and Schnittflache des Gehirns mak-
roskopisch keine krankhaften Veranderungen zu sehen.
Histologische Untersuchung: Im Gehirn, auf den Hirnmantel beschrankt,
rechtsseitig im Gyrus sigmoideus, linksseitig am Gyrus ansatus- and Pars cauda-
lis-Abschnitt der Hirnrinde, rind ausgedehnte entziindliche Herde vorhanden.
Die Herde befinden sich im allgemeinen unter der weichen Hirnhaut in der
oberflachlichen Schicht der grauen Substanz, obwohl sie Bich her and da zu
den tiefergelegenen Teilen hin, fast ganz bis zur weiBen Substanz ausdehnen.
Auf diesen Gebieten ist das Lumen der BlutgefaBe erweitert and enthalt viele
rote Blutkorperchen and weil3e Blutzellen. Die Wand einzelner BlutgefaBe ist
verdickt and von einer sich mit Eosin homogen rosa farbenden Substanz durch-
trankt. In der Umgebung einzelner BlutgefaBe sind geringere oder schwerere,
aus histiozytenartigen Zellen bestehende mantelartige Infiltrationen zu beobach-
ten. Das ektodermale Gebiet ist dichter oder lockerer mit Mikro- and Makro-
gliazellhaufen infiltriert, zwischen denen auch einige Lymphozyten and wei 3e
Blutzellen mit gelapptem Kern zu erkennen sind. Die Kerne der in den Herden
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befindlichen Zellen sind gut gefarbt. AuBer den eben bescltriebenen Herden
sind auch kleinere umschriebeue Herde von 150-200,u, Durchmesser wahrnehm-
bar, haufig auch in den tieferliegenden Schichten der grauen Substanz. Diese
Herde bestehen im wesentlichen aus ebensolchen Zellen wie die groBen. Mit
Thionin-Farbung kann nachgewiesen werden, daB einzelne der auf dent Gebiet
Abb. 1. Infiltration in der grauen Substanz der Hirnrinde and in den weichen Hirnhauten.
II.-E.-Farbung. Vergrof3erung 1 : 80 (Hund)
Abb. 2. tiberwiegend aus Gliazellen bestehende Infiltration in der grauen Substanz der Hirnrinde.
H.-E.-Farbung. Vergrof3erung 1 :400 (Hund)
der entzundlichen Herde anzutreffenden Nervenzellen geschwollen sired, die
Tigroidschollen in ihrem Plasma sind zerfallen, and der Kern der Zellen liegt
exzentrisch. An einzelnen Abschnitten der weichen Hirnhaut, insbesondere den
groBen and kleinen Herden entsprechend, aber auch an anderen Stellen, sind die
Blutgefaf3c sehr stark erweitert; sie enthalten viele rote Blutkorperchen and weiBe
Blutzellen. Die Substanz der weichen Hirnhaut ist hauptsachlich perivaskular
von Lymphozyten and histiozytenartigen Zellen infiltriert (Abb. 1 and 2).
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240 A. KARDEVAN and P. KAPP
In den in der Rindensubstanz des Gehirns beschriebenen Herden vermoch-
ten wir fur Toxoplasmose charakteristische Pseudozysten nachzuweisen (Abb. 3).
Ihre Anzahl and Verteilung in den einzelnen Herden ist sehr verschieden. Die
groberen Herde konnen auch 8-10 Pseudozysten enthalten, in den keeineren
befindet sich iiberhaupt keine oder lediglich eine Pseudozyste. Nicht selten sind
Pseudozysten auch in geringerer oder groBerer Entfernung von den beschriebe-
nen entziindlichen Herden vorzufinden, wo sie ohne jede Zellreaktion im Hirn-
gewebe liegen. Der. Durchmesser der Pseudozysten schwankt zwischen 10,4-
15,6 u. Auf den mit Hamatoxylin-Eosin gefarbten Schnitten weisen die Zysten
eine feine, blaB gef$rbte, sich aber von der Umgebung gut differenzierende
Abb. 3. Pseudozyste in der H'rnrindensubstanz (Hund). H.-E.-Farbung. VergroBerung 1 : 480
donne Hiille auf ; der Kern der Toxoplasmaexemplare in den Zysten tritt in
der blaBrosa gefarbten Grundsubstanz in Form von feineren oder groberen
blauen Punkten in Erscheinung. An einer Stelle, in der Umgebung eines Blut-
gefaf?es, fanden wir auch in einer kleinen Gruppe frei gelagerte Toxoplasmen
(Abb. 4). Mit der FEULGENSChen Thymonukleinsaure-Reaktion farbt sich der
Kern der Toxoplasmen hellrot.
Die Toxoplasma-Pseudozysten sind den von Enzephalitozoen hervorge-
rufenen Zysten sehr ahnlich. Die in den von uns beobachteten Pseudozysten
befindlichen Parasitenexemplare waren jedoch gramnegativ, wahrend bei den
Enzephalitozoen die Gram-Farbung bekanntlich positiv ausfallt.
AuBer den angefiihrten Veranderungen fanden wir auf anderen Hirnge-
bieten lediglich Hyperamie in der grauen Substanz. In der weiBen Substanz
der Hirnrinde konnten wir mit der SPIELMEYERSchen Markscheidenfarbung
kleinere oder groBere unregelmaBig geformte demyelinisierte Gebiete nach-
weisen (Abb. 5). Auch auf kleineren Gebieten des Hirnstammes, and zwar in der
Gegend der Vierhiigel, der VAROLSchen Briicke and des Striatums sahen wir
demyelinisierte Zonen. Hier and da waren in der Nachbarschaft der demyeli-
nisierten Gebiete leichtere gliazellige Reaktionen and Vakuolenbildungen sicht-
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bar. Die Blutgefaf3e des Rnckenmarks waren erweitert ; einzelne Nervenzellen
am Lumbalabschnitt sind blaB gefarbt and gedunsen, ihr Kern liegt exzentrisch.
Bei der histologischen Untersuchung der peripheren Nerven fanden wir
am Nervus ischiadicus keine erwahnenswerten Veranderungen. In einem Seh
Abb. 4. Frei gelegene Toxoplasmen neben einem BlutgefaB. Hirnrinde (Hund). H.-E.-Farbung-
VergroBerung 1 : 480
Abb. 5. Demyelinisation der markhaltigen Nervenfasern in der Hirnrinde (Hund).
Markscheidenfarbung nach Spielmeyer. VergroOerung 1 : 80
nerv konnten wir in der Nahe des Chiasmas eine Pseudozyste nachweisen, die
nicht von entziindlieher Zellreaktion umgeben war.
In.der Leber war leichte serdse Entziindung zu beobachten.
In beiden Nieren ist im allgemeinen Hyperamie, hie and da in der Um-
gebung der Blutgefal3e mafige rundzellige Infiltration zu sehen. In einer Niere
ist das Interstitium, von der Rinden- his zur Marksubstanz auf einem ungefahr
keilformigen Gebiet von Lymphozyten, Histiozyten and Granulozyten stark
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infiltriert. Die Kapillaren der Glomeruli sind auf diesem Gebiet hyalin degene-
riert, im freiem Raum einzelner BOWMANSChe Kapseln befindet sich geronnene
Flussigkeit, and die Kanalchen sind mit Zellfragmente enthaltenden Hyalinzylin-
dern angefiillt.
In der Lunge konnten im allgemeinen Hyperamie and in einzelnen Gebieten
Odem nachgewiesen werden. Einige Alveolenhohlen enthielten auger Serum auch
neutrophile Granulozyten sowie geschwollene and desquammierte Epithelzellen.
In den Epithelzellen der Bronchien waren Staupekorpechen nachweisbar.
Kadaver einer 8 Monate alten, wolfsgrauen deutschen Schaferhiindin aus
dem Besitz des Budapester Einwohners R. K. B. Klinische Diagnose: Enzephalo-
myelitis, Febris catarrhalis inf. canis.
Bei der Sektion stellten wir lediglich akute Herzerweiterung, Lungenodem
and Magenkatarrh fest. Im Gehirn waren makroskopisch Veranderungen nicht
zu beobachten.
Histologische Untersuchung : Mit der S1IELMEYERschen Markscheidenfar-
bung waren an vielen Stellen der weiBen Substanz der Hirnrinde sowie in den
Hauptblattern des Kleinhirnwurms kleinere and groBere, unregelmaBig geformte
demyelinisierte Gebiete nachweisbar. In der Umgebung der entarteten mark-
haltigen Nervenfasern ist eine leichte gliazellige Reaktion sichtbar. In der
Hirnrinde, in der Gegend des' Sulcus praesylvius, unmittelbar unter der Hirn-
haut, konnten einige kleinere, groBtenteils aus Gliazellen bestehende Herde
festgestellt werden. In einem Gliazellherd war eine Toxoplasmen enthaltende
Pseudozyste von 12 It Durchmesser nachzuweisen. Trotz sorgfaltigen Suchens
fanden wir nur noch an einer Stelle, and zwar im Nucleus caudatus, in Nach-
barschaft der seitlichen Hirnkammer, eine Pseudozyste, die ohne jede Zell-
reaktion im Hirngewebe saB. Sonst waren im Hirn keine pathologischen Veran-
derungen. Die anderen Organe des Hundekadavers wurden histologisch nicht
untersucht.
Wir konnten demnach an einem Hund Hyperkeratose der Nasenspiegel
and Sohlenpolster sowie katarrhalische Darmentzundung mit dem histologischen
Befund einer wohl ausgebildeten disseminierten produktiven Enzephalitis and
Demyelinisation der markhaltigen Nervenfasern, am anderen Hund Magen-
katarrh, akute Herzerweiterung and Lungenodem mit dem histologischen Be-
fund einer ausgedehnten Demyelinisation der markhaltigen Nervenfasern and
geringfugigen Herdenzephalitis produktiven Charakters. Im Bereich der ent-
ziindlichen Herde, aber auch von diesen entfernt, fanden sich in beiden Fallen
toxoplasmahaltige Pseudozysten.
Im Gehirn von Hunden, die von Toxoplasmen teils durch natiirliche Anstek-
kung, teils dutch experimentelle Ubertragung befallen waren, beschrieb Coitus
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(1952) zwei Formen der Veranderungen: eine mit Nekrosen einhergehende and
eine andere, bei der in der Hirnsubstanz granulomartige Herde hauptsachlich aus
Gliazellen gebildet wurden. In unseren beiden Fallen waren die histologischen
Gehirnveranderungen der letzterwahnten Form ahnlich, and die entziindlichen
Prozesse beschrankten sich fast ausschliellich auf den Hirnmantel.
In letzter Zeit tauchte. die Frage auf, ob die zum Verenden der Hunde
fiihrenden Prozesse in den von Toxoplasmen befallenen Hunden von den Toxo-
plasmen allein hervorgerufen werden, oder ob in der Entwicklung der Krankheit
nicht gegebenenfalls auch andere Faktoren mitwirken. In dieser Hinsicht bezie-
hen wir uns auf die Mitteilungen von MILLER (1951), SEIBOLD and HOERLEIN
(1955) Bowie CAMPBELL, MARTIN and GORDON (1955), die bei Toxoplasmose in
den verschiedenen Zellen die fur Hundestaupe bezeichnenden azidophilen Zyto-
plasma-EinschluBkorperchen beobachteten and infolgedessen annehmen, daB
das Virus der Hundestaupe Disposition zu Toxoplasmose erzeugt. In dem unser-
seits untersuchten ersten Hunde vermochten auch wir in den Epithelzellen der
Bronchien azidophile Staupekorperchen zu beobachten. Wir haben daher den
Eindruck, daB die Toxoplasmose auch in diesem Fall im AnschluB an die Hunde-
staupe als ihre Komplikation auftrat. Vermutlich war auch im zweiten Fall die
Hundestaupe die Grundkrankheit, da die toxoplasmabedingte Enzephalitis in
diesem Tier so schwach in Erscheinung trat, daB sie das Verenden allein nicht
hervorrufen konnte.
Unsere Untersuchungsergebnisse bieten neuere Angaben zur Atiologie der
sog. >Hard pad diseasecc, da wir im ersten Fall das charakteristische Bild dieser
Krankheitsform (Hyperkeratose des Nasenspiegel- and Sohlenpolsters, die
Demyelinisation der markhaltigen Nervenfasern im Hirn) beobachteten. Auf
Grund unserer Untersuchungsresultate sind wir in Vbereinstimmung mit
mehreren Autoren (LAUDER and Mitarbeiter, 1954 ; u. a.) der Meinung, daB die
sog. Hard pad disease keine selbstandige Krankheit darstellt, sondern sich
vermutlich als eine Teilerscheinung der Hundestaupe entwickelt. Die Demyelini-
sation der markhaltigen Nervenfasern im Gehirn kommt unserer Ansicht nach
wahrscheinlich auf allergischer Grundlage ureter Mitwirkung des Hundestaupe-
virus zustande. Als Ursache der Demyelinisation konnte in unseren Fallen mogli-
cherweise auch die Wirkung der von den Toxoplasmen erzeugten Toxine in Frage
kommen. Dagegen spricht allerdings, daB zwischen dem AusmaB der Demyelini-
sation and der Anzahl der Toxoplasmen kein Zusammenhang zu bestehen scheint,
da die Demyelinisation in unserem zweiten Fall, wo Toxoplasmen nur in gerin-
ger Zahl anwesend waren, groBeren Umfanges war als im ersten Fall, der eine
schwerere Form der toxoplasmabedingten Enzephalitis aufwies.
Es ergibt rich die Frage, wie haufig mit dem Vorkommen der Toxoplas-
mose unter den Hunden in Ungarn gerechnet werden muB. In dieser Hinsicht
bieten unsere verhaltnismaBig wenigen Untersuchungen keine bewertbaren
Ergebnisse. Die Tatsache jedoch, daB wir bei 2 von 20 unter neuralen Sympto-
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men eingegangenen Tieren toxoplasmabedingte Enzephalitis bzw. Ansteckung
mit Toxoplasmen feststellen konnten, beweist, daB these Krankheit in Ungarn
nicht selten vorkommt, insbesondere wenn wir berBcksichtigen, daB wir nur
die mit Neurosymptomen verbundenen Formen der Krankheit gesucht batten.
Das AusmaB der Verseuchung lieBe sich in grol3erem MaBstab lediglich durch
serologische Untersuchungen feststellen, obwohl hinsichtlich der Zuverlassig-
keit der verschiedenen serologischen Verfahren noch kein einheitlicher Stand-
punkt zutage tritt. Vom Gesichtspunkt des offentlichen Gesundheitswesens
deuten auch die bisherigen Ergebnisse darauf hin,.daB mit der Toxoplasmose
der Hunde auch in Ungarn gerechnet werden muB and hier, ebenso wie im Aus-
land vielfache Gelegenheit zur Ubertragung auf Menschen besteht.
Neben den an Hunden vorgenommenen systematischen Untersuchungen
verfolgten wir auch die Toxoplasmaerkrankungen anderer Tierarten. Wenn bei
den im Institut sezierten verschiedenen Tieren Veranderungen vorkamen, die
Verdacht auf Toxoplasmose erwecken konnten, wurden die Organe der Kadaver
eingehend histologisch untersucht and aus den Veranderungen aufweisenden
Organen auch experimentelle Ubertragungsversuche vorgenommen. Im weiteren
teilen wir unsere bei einer Katze and bei einem Kaninchen gemachten Beobach-
tungen mit. Aus letzterem vermochten wir durch experimentelle Ubertragung
die Toxoplasmen zu isolieren.
Kadaver einer 4jahrigen, kastrierten, schwarzen Hauskatze aus dem Besitz
des Budapester Einwohners E. J. Klinische Diagnose : Enzephalitis.
Per Sektionsbe fund der intraabdominalen and intrathorakalen Organe
war im wesentlichen negativ. Die BlutgefaBe der Hirnhaute waren erweitert, die
Schnittflache der Hirnsubstanz in der Gegend des rechten Nucleus caudatus
war gelb gefleckt.
Bei der histologischen Untersuchung des Gehirns waren rechtsseitig, ins-
besondere im Nucleus caudatus, im Nucleus lentiformis and im vorderen Drittel
des Thalamus, schwere Veranderungen zu sehen. An dem der seitlichen Hirn-
kammer unmittelbar benachbarten Abschnitt des Nucleus caudatus ist die
Hirnstruktur in einer ziemlich schmalen Zone noch gut erkennbar. Die Wand
der kleineren and groBeren BlutgefaBe ist verdickt and farbt sich mit Eosin
intensiv and homogen, die Endothelzellen sind geschwollen, stellenweise ver-
schwunden. Perivaskular sind lymphozytare and histiozytare Infiltrationen
sichtbar (Abb. 6). An den anderen Abschnitten des Nucleus caudatus sowie am
kranialen Abschnitt des Nucleus lentiformis and des Thalamus ist die Hirn-
substanz vollig zerstort. Ihr spongios aufgelockertes Gewebe ist mehr odor
weniger mit Mikrogliazellen angefullt (Abb. 7 and 8). Die Gliazellen sind an ein-
zelnen Stellen gut gefarbt, vielenorts sind aber an ihrem Kern Anzeichen der
Karyorrhexis zu beobachten. Das Plasma vieler Gliazellen ist von vakuoloser
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I N'I I:Ii'UCIIUNGEN VBER DAS VORKOMMEN DER TOXOPLASMOSE AN I-IAUSTIEREN IN UNGARN 245
Ibb. b. Perivaskulare Infiltration im Nucleus caudatus (Katze). H.-E.-Farbung. Vergrol3erung 1:340
lbb. Diffuse Infiltration im Nucleus caudatus. In der Mitte des Gesichtsfeldes eine Pseudo-
zyste (Katze). H.-E.-Farbung. VergroBerung 1 :340
Abb. 8. Nucleus caudatus. Aufgelockerte, spongiose Hirnsubstanz (Katze). H.-E.-Farbung.
Vcrgrof3erung 1 : 340
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Struktur. Die Vakuolen erweisen sich nach Sudan III- bzw. Scharlachrotfarbung
groBtenteils als Fett-Tropfchen (Fettkornchenzellen). Auf den von Gliazellen
infiltrierten and nekrotischen Gebieten sind die Umrisse der Blutgefa13e nur
verschwommen zu erkennen, der Kern der Endothelzellen ist blaB gefarbt, ja
stellenweise sogar verschwunden oder pyknotisch. In der Wand mehrerer Blut-
gefaBe konnen im Plasma der adventitiellen Zellen kleinere and groBere Fett-
tropfchen nachgewiesen werden. Auch in den hie and da noch erkennbaren,
schwer degeneriertenNervenzellen sind Fett-Tropfchen sichtbar. Auf den vorhin
beschriebenen Gebieten befinden sich in ziemlich groBer Zahl toxoplasmahaltige
Pseudozysten. Die Pseudozysten sind unregelmafig verstreut, ihr Durchmesser
betragt im allgemeinen 10-15 It, ihr Aufbau gleicht im wesentlichen dem der
vorhergehend beschriebenen.
In anderen Gehirnregionen, and zwar im vorderen Drittel des Hirnmantels
auf beiden Seiten, in starkerem AusmaB in der weillen als in der grauen Substanz
sowie in der Gegend der Corp. quadrigemina, des linksseitigen Nucleus caudatus
and Thalamus, sind rings um die kleineren and groBeren Blutgefal3e breite,
aus Lymphozyten and Histiozyten bestehende, mantelartige Infiltrationen zu
beobachten. Pseudozysten fanden wir in diesen Gebieten nur vereinzelt.
Die weichen Hirnhaute weisen an vielen Stellen starke lymphozytare In-
filtrationen auf.
Aus der Beschreibung geht hervor, daB die Toxoplasmen in der von uns
untersuchten Katze, im Gegensatz zu der an den beiden Hunden beobachteten
produktiven Enzephalitis, mit ausgedehnteren Nekrosen verbundene Prozesse
herbeigefiihrt haben.
Das etwa 8 Monate alte, weiBe Kaninchenweibchen ergab folgenden
Sektionsbefund: Kadaver eines stark abgemagertes Tieres. Die Milz ist vergroBert,
an ihren Randteilen sind linsengroBe, an der Oberflache etwas hervorstehende,
in die Tiefe ungefahr keilformig hineinreichende, anderswo hirsekorngrof3e,
ungefahr runde grauweiBe kleine Herde zu sehen. Die kleinen Herde sind von
der Umgebung nicht scharf getrennt, ihre Schnittflache ist grauweiB, im all-
gemeinen trocken and brocklig. Die Schnittflache einzelner kleinerer Herdchen
ist schwach speckglanzend. Die Schleimhaut des Magens and Diinndarms ist
etwas gerotet and stellenweise vaskular injiziert. Die Umgebung der mesenteria-
len Lymphknoten ist seros infiltriert. Die mesenterialen Lymphknoten sind
geschwollen, ihre Substanz ist ungewohnlich weich. Ihre Schnittflache ist galler-
artig glanzend and Behr feucbt. In der Substanz eines Lymphknotens sind einige
hirsekorngroBe, grauweiBe, mattglanzende Herdchen zu sehen. Leber and Nieren
sind normal. Die Lunge ist hellziegelrot and fiihlt sich auf hirsekorngroBen Ge-
bieten kompakt an. An ihrer Schnittflache sind hirsekorn- his kleinerbsengroBe,
grauweiBe Herde mit verschwommenen Grenzen zu beobachten.
Die BlutgefaBe der Hirnhaute sind erweitert, die Hirnsubstanz ist schwach
odematos infiltriert. Die aus der Milz, der Leber and den mesenterialen Lymph-
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knoten vorgenommenen bakteriologischen Untersuchungen fielen negativ aus.
Im Ausstrichpraparat aus der Milz vermochten wir durch mikroskopische Un-
tersuchung Toxoplasmen nicht nachzuweisen.
Histologische Untersuchung: Die Milz ist im allgemeinen blutreich, die
Zellen der roten Pulpa sind locker gelagert. Zwischen den Pulpazellen befindet
sick eine serose Fliissigkeit. Hie and da sind unter der Milzkapsel auch kleinere
oiler gro13ere Blutungen sichtbar. In der Milzsubstanz kann man verstreut,
den makroskopisch bcobachteten Herden entsprechend, Nekrosegebiete wahr-
nehmen. Die ausgedehnteren nekrotischen Gebiete liegen unmittelbar unter der
Abb. 9. Ausgedehnter Nekroseherd in der Milzsubstanz (Kaninchen). H.-E.-Farbung.
Vergrol3erung 1 : 80
Milzkapsel and erinnern an Infarkte (Abb. 9). In ihrer mit Hamatoxylin-Eosin
im allgemeinen homogen rosa gefarbten Substanz sind die Umrisse der Zellen
and Blutgefaf3e nur verschwommen zu erkennen. Die nekrotischen Gebiete
enthalten dicht gelagerte kleinere and grol3ere Fett-Tropfchen. Am Rand der
Nekrosegebiete sind hie and da in geringer Anzahl neutrophile Granulozyten
and Lymphozyten anzutreffen. Die in anderen Abschnitten der Milzsubstanz
anwesenden nekrotischen Gebiete sind im allgemeinen kleiner als die vorigen,
rund oder unregelmaf3ig geformt, and befinden sich einmal in der roten Pulpa,
cin andermal in den Malpighischen Korperchen. In der roten Pulpa and in den
Malpighischen Korperchen ist die Wand einzelner Blutgefal3e verdickt and mit
Eosin homogen hellrot gefarbt.
In den mesenterialen Lymphknoten sind die Follikel auseinandergeschoben,
die Substanz der Lymphknoten ist aufgelockert, die Gewebsspalten sind mit sero-
ser Fliissigkeit gefiillt. In der aufgelockerten Lymphknotensubstanz treten un-
regelmaf3ig geformte nekrotische Gebiete in Erscheinung, die im wesentlichen
ahnlichen Aufbau zeigen wie die in der Milzsubstanz beschriebenen Nekrosc-
herde.
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Nach langem Suehen sind in der Milz, in der Umgebung der Nekroseu.
sowie in den Lymphknoten winzige pseudozystenartige Gebilde zu sehen. Freie
,roxoplasmaexemplare vermochten wir nicht zu finden.
In der Lunge sired an mehreren Stellen, auf umschriebenen, runden oder
unregelmiif3ig geformten Gebieten, die Alveolen mit proliferierendem Binde-
gewebe angefiillt. Im Gehirn, in der grauen Substanz der Hirnrinde, unmittel-
bar tinier der Hirnhant Bowie im Hirnstamm sind kleincre, hauptsdcblich an,
Gliazellen bestehende Herdchen sichtbar (Abb. 10). Pseudozysten konnten weir
in diesen Herden nicht nachweisen.
lhh. 10. Hauptsachlich aus Gliazellen bestehender kleiner Herd in der Hirnrinde (Kaninchen).
H.-E.-Farbung. Vergrol3erung 1 :340
Aus der Milz des oben besprochenen Kaninchenkadavers versuchten wir,
die Toxoplasmen durch experimentelle 1`lbertragung auf Versuchstiere zu isolie-
ren. Wir bereiteten aus der Milz des Kaninchens mit physiologischer Kochsalz-
losung eine Suspension, von dem wir 0,3-0,4 ml in die Bauchhohle von 2 Mausen
spritzten. Nach der Impfung wiesen die beiden Mause keinerlei Krankheitssymp-
tome auf. Eine der Mause toteten wir 5 Wochen nach der Impfung ; die aus
ihrem Him bereitete Emulsion wurde in die Bauchhohle von 4 Mausen injiziert.
3 Mause gingen am 10., 12. and 19. Tage nach der Impfung ein. Die mikroskopische
Untersuchung der Ausstrichpraparate aus der Bauchhohlenfliissigkeit, aus der
Milz and Leber auf Anwesenheit von Toxoplasmen fiel in alien Fallen negativ
aus. Im Gehirn der am 19. Tage eingegangenen Maus fanden wir jedoch bei der
histologischen Untersuchung (die anderen Manse waren diesbezuglich nicht
untersucht worden) zahlreiche Pseudozysten, die sich ohne jede Reaktion im
Hirngewebe befanden. In den weichen Hirnhauten war eine umschriebene, chro-
nische Entziindung festzustellen. Die 4. Maus wurde am 64. Tage nach der
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UNTERSUCHUNGEN VBER DAS VORKOMMEN DER TOXOPLASMOSE AN HAUSTIEREN IN UNGARN 249
Impfung getotet. Die histologische Untersuchung ergab das gleiche Resultat
wie bei der am 19. Tage eingegangenen Maus.
Mit dem aus dem Gehirn der am 64. Tage getoteten Maus mit physiologi-
scher Kochsalzlosung hergestellten Suspension infizierten wir 10 Mause and 2
Goldhamster durch Einspritzung in die Bauchhohle. 5 Mausen verabreichten
wir gleichzeitig mit der Suspension and nochmals 24 Stunden spater jeweils
5 mg Cortison-Azetat subkutan. Vom 4. Tage nach der Infektion beginnend,
untersuchten wir die intraabdominale Fliissigkeit taglich oder zweitaglich auf
Anwesenheit von Toxoplasmen. In der Bauchhohlenflussigkeit der mit Cortison-
Abb. 11. Freie Toxoplasmen in der Bauchhohlenflussigkeit einer Maus. Experimentelle
Ubertragung. Farbung nach GIEMSA. Vergrof3erung 1 : 480
Azetat behandelten Mause waren vom 6. Tage an, bei einem Teil der nicht mit
Cortison-Azetat behandelten Tiere vom 8. Tage an auf den nach Giemsa gefarbten
Ausstrichpraparaten teils frei anwesende, teils in Zellen eingeschlossene Toxo-
plasmen nachweisbar (Abb. 11). Die mit Cortison-Azetat behandelten 5 Mause
Bingen am 9. and 10. Tage nach der Infektion ein. 1-2 Tage vor dem Vcrenden
waren die Mause matt. Die Toxoplasmen waren in den Ausstrichpraparaten aus
dem Bauchhohlenexsudat sowie der Milz and Leber samtlicher MAuse feststell-
bar. Von den nicht mit Cortison-Azetat behandelten Mausen gingen 3 am 11.
and 12. Tage nach der Infektion ein; auch ihre Untersuchung auf Anwesenheit
von Toxoplasmen ergab ein positives Resultat. Zwei mit Cortison-Azetat nicht
behandelte Mause verendeten erst am 28. and 29. Tage. Bei samtlichen Mausen,
die 9-12 Tage nach der Infektion verendeten, beobachteten wir anlaBlich der
Sektion Darmentznndung, maBige Milzschwellung, Leberschwellung and dicht
gelagerte, nadelstichgrol3e graue Herde in der Leber. Bei der histologischen
Untersuchung finden sich in der Leber der Mause unregelmaBig gelagerte, stellen-
weise konfluierende Nekroseherde, die zur Umgebung hin nicht von entziindlicher
Reaktion umschlossen sind. Die Leberzellkerne sind im Allgemeinen geschrumpft
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and dunkel gefarbt oder in geringerem oder grof3eren Male gequollen and
enthalten grobkorniges Chromatin. In der Lebersubstanz sind verstreut Toxoplas-
mahaufen zu erkennen. In der Milz rind histologisch ebenfalls frei anwesende
Toxoplasmen nachweisbar. In der Niere eines Tieres waren freie Toxoplasmen
auch in den Glomeruli. In der Lunge ist das histologische Bild einer beginnenden
interstitiellen Pneumonia sichtbar, die freien Toxoplasmen liegen in Haufen.
Im Gehirn einiger der an akuter Toxoplasmose verendeten Mause befanden sich
aus Gliazellen bestehende kleine Herde sowie hie and da in Gruppen freie Toxo-
plasmen.
Abb. 12. Milzscliwellung, Nekroseherde in der Leber and Milz (Kaninchen).
Experimentelle 11hertragung
Zwei der nicht mit Cortison-Azetat behandelten Mause, von denen eine in
ihrer Bauchhohlenflussigkeit Toxoplasmen enthielt, verendeten, wie schon er-
wahnt wurde, erst am 28. and 29. Tage nach der Infektion. Bei einer dieser
Mause war in den dem Verenden vorangehenden Tagen die partielle Lahmung
der hinteren Extremiti ten festzustellen. Bei der Sektion war nichts als eine
maBige Milzschwellung zu seheri, Toxoplasmen waren in der Bauchhohlenflussig-
keit in der Milz and Leber nicht vorhanden. Das Gehirn dieser Mause wurde
nicht untersucht.
Die beiden Goldhamster hockten vom 3.-4. Tage nach der Impfung zu-
sammengekauert im Kafig, waren appetitlos, magerten in kurzer Zeit stark ab
and verendeten am 15. Tage nach der Ansteckung. Bei der Sektion vermochten
wir neben der Abmagerung nichts festzustellen. In den aus Bauchhohlenflussig-
keit, Milz and Leber hergestellten Ausstrichpraparaten waren Toxoplasmen
nicht nachweisbar. Bei der histologischen Untersuchung sah man in der Leber
Aktivierung der RES-Zellen and hie and da die Bildung von submiliaren Herd-
chen, die aus RES-Zellen bestanden. In der Lunge waren interstitielle Pneumonic
and einige winzige Pseudozysten, in der Herzmuskulatur herdartige histiozytare
and lymphozytare Infiltration and in den Herzmuskelfasern gut ausgebildete
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Pseudozysten zu beobachten. Das Gehirn enthielt produktive, vor allem aus
Gliazellen bestehende Herde and Pseudozysten.
Mit der Bauchhohlenfliissigkeit einer an akuter Toxoplasmose erkrankten
Maus infizierten wir zwei Kaninchen, and zwar in der Weise, daB wir in die
Bauchhohle der kranken Maus 2 ml physiologische Kochsalzlosung einfiihrten
and 0,2 bzw. 0,4 ml der zurnckgewonnenen toxoplasmahaltigen Flnssigkeit den
Kaninchen intravenos injizierten. Die Tiere verendeten am 5. and 6. Tage nach
der Ansteckung. Bei der Sektion waren in beiden Kaninchen Milzschwellung,
in Leber and Milz zahlreiche nekrotische Herde (Abb. 12), Dunndarmentzundung,
Schwellung der mesenterialen Lymphknoten and Lungenodem festzustellen.
Die Versuchskaninchen wiesen demnach im wesentlichen dieselben Yeranderun-
gen auf wie das Ausgangsmaterial, die auf naturliche Weise erkrankten Kaninchen.
Zusammenfassung
Im vergangenen and gegenwartigen Jahr wurden 8 Monate hindurch alle sezierten Hunde,.
bei denen im Leben neurale Symptome aufgetreten waren, auf Toxoplasmose untersucht. Bei 2
der 20 untersuchten Hunde konnte histologisch toxoplasmabedingte produktive herdartige
Enzephalitis bzw. Befall mit Toxoplasma festgestellt werden. Auf Grund der in einem Hunde-
kadaver in den Epithelzellen der Bronchien nachgewiesenen azidophilen Staupekorperchen wird
angenommen, dall in diesem Fall die Toxoplasmose im AnschluS an Hundestaupe aufgetreten
war. Im weiteren wurde im Laufe der Routineuntersuchungen bei einer unter neuralen Sympto-
men zugrunde gegangenen Katze and bei einem Kaninchen Toxoplasmose nachgewiesen. Aus
dem Kaninchenkadaver konnte durch 1.)berimpfung auf Versuchstiere ein neuer Toxoplasma-
Stamm isoliert werden. Bei den mitgeteilten Toxoplasmosefallen handelt es sich um die ersten
diesbeziiglichen Beobachtungen in Ungarn an Hund, Katze and Kaninchen.
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UBER DIE BEWERTUNG
DER LABORATORIUMSUNTERSUCHUNGSRESULTATE
BEI DEN MIT CHLORAMPHENICOL BEHANDELTEN
TYPHUSKRANKEN
Von
1. FI RESZ, M. KUBINYI-SCHWANNER and Gy. .JOZSA
.Stnatlirhes Institut fur Hygiene and Laszlo-Krankenhaus, Budapest
(Eingegangen am 8. August 1956)
Durch die Anwendung von Chloramphenicol (im weiteren Chi.) in der
Therapie der Typhuserkrankungen Mat sich nicht nur der klinische Verlauf des
Typhus verandert, sondern auch die Notwendigkeit einer Revision in der Bewer-
tung der diagnostischen Laboratoriumsverfahren ergeben. In erster Linie gilt
dies fiir die WIDALSche Reaktion. Uber ihr verandertes Verhalten stehen zahl-
reiche Literaturangaben zur Verfiigung, die aber durchaus kein einheitliches
Bild zeigen. Nach einigen Autoren wird die WIDALSche Reaktion von
Chi. iiberhaupt nicht beeinflul3t (SCURO and SORICE [1], BECHERMANN and
OTTO [2], BROGLIE [3], ROMANO [4], WOODWARD [5], KNIGHT and Mitarbeiter
[6], FOSTER and CONDON [7], MOLLARET [8] and viele andere). Sehr viele Autoren
behaupten hingegen, da3 der WIDALSche Titer bei der Chl.-Behandlung rasch
sinkt, ja sogar negativ wird (BREDA and TASCA [9], D'ALESSANDRO And BEVERE
[10], LAPORTE [11], MUSOTTO [12], PELLEGRINI [13], FAJN and LIHATSCHEWA
[141, NADSCHMIDDINOW and SWESNIKOWA [15] u. v. a.). Laut ANGYAN and
Mitarbeitern [16] zeigt die WIDALSche Reaktion im Laufe der Behandlung aus-
gepragte Schwankungen. Die diesbeziiglichen Meinungsverschiedenheiten gehen
am deutlichsten aus der die Ergebnisse von 35 Autoren zusammenfassenden
Tabelle von SCURO and SORICE [1] hervor. Hiernach wurden bei 543 Kranken sog.
normale Agglutinintiter beobachtet, wahrend die Titer bei 589 rasch sanken and
bald negativ wurden. Ein Vergleich der vcrschiedenen Angaben wird dadurch
erschwert, da3 man in vielen Mitteilungen die 0- and H-Agglutinine nicht
unterscheidet bzw. gar nicht erwahnt and nur ganz allgemein von der WIDAL-
schen Reaktion spricht. Die wenigen Autoren, die sich mit der Entwicklung der
0- and H-Titer befassen, stimmen im groBen ganzen darin iiberein, daB der
H-Titer von Chi. weniger beeinflul3t wird and wahrend der Krankheit weiter
steigt, der O-Titer dagegen auf Chl.-Wirkung unverandert bleibt oder sinkt.
Laut MATTHAEI [17], KNAPP and GERNER [18], ROIIANO [4], CHRIST [19],
SEELIGER Arid VORLAENDER [20] entwickelt sich der O-Titer bei den. mit Chi.
behandelten Kranken entweder langsam oder iiberhaupt nicht, wahrend der H-
Titer von Chi. nicht wesentlich beeinflu3t wird.
Auf Grund der vorstehend angefiihrten, durchaus nicht vollstandigen An-
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gaben hielten wir es fur notig, auch unserseits die Frage zu priifen, wie die Chl.-
Therapie auf die die Laboratoriumsergebnisse wirkt. Die WIDALSChe Reaktion
hielten wir auch bisher schon fur eine nur mit Vorbehalt and Umsicht bewert-
bare indirekte Methode, die von zahllosen Faktoren abhangt and die bakteriolo-
gische Diagnose keinesfalls zu ersetzen vermag. Aus diesem Grunde besebrankten
wir uns nicht allein auf die Beobachtung ihres Verhaltens, sondern verfolgten
gleichzeitig auch die bakteriologischen Resultate, d. h. Zuchtungen aus dem Stuhl
and Hamokulturen.
Aus dem Krankeninaterial des Laszlo-Krankenhauses wurden 76 Kranke systematiscb
nach folgendem Verfahren untersucht :
Von jedem Kranken entnahmen wir zweitaglich Blut and mit dem Rectumstabchen
Stuhl. Bei jedem neu aufgenommenen Kranken wurde also die erste Untersuchung bereits am
Aufnahmetage, spatestens aber am folgenden vorgenommen. Aus den Blutsera fuhrten wir mit
dem bei uns and im ganzen Lande gebrauchlichen, von uns hergestellten H- and O-Diagnostikum
bei jeder Gelegenheit von der Verdunnung 1 : 100 beginnend die 0- and H-Agglutination durch.
Die Ergebnisse wurden nach 20 22stundiger Inkubation mit dem Agglutinoskop abgelesen.
Zwecks Vermeidung der subjektiven Bewertung and der sich daraus ergebenden Abweichungen
wurde die Ablesung stets von derselben Person vorgenommen. Wir rechneten damit, daB rich
der Krankheitserreger aus dem Blut oder Stuhl seltener zuchten lassen wird als vor der Ein-
fiihrung der Antibiotikumtherapie, weshalb wir unsere Technik zu verbessern and moglichst
viele positive Ergebnisse zu erzielen suchten. Von den Hamokulturen, d. h. von der die Blut-
gerinnsel enthaltenden Galle, strichen wir nicht nur nach 24 and 48 Stunden auf den Brillant-
grun-Nahrboden, sondern inkubierten diesen 6 Tage lang and stellten die ausgebreiteten Platten
taglich fest. Die Stuhlproben wurden auf 3 Nahrboden, Wismut-, Brillant- and Desoxycholat-
zitrat-Platten gestrichen, hiernach die rektalen Rohrchen in Anreicherungsnahrboden gelegt and
aus diesem nach 24 Stunden auf Wismut- and Brillantplatten gestrichen. Als anreichernden
Nahrboden verwendeten wir unter den zahlreichen zur Zuchtung von Darmbakterien, haupt-
sachlich Salmonellen, gebrauchlichen Nahrboden den von STOKES and OSBORN [21] neuerdings
empfohlenen, Na selenit, Na taurocholat and Brillantgrun enthaltenden, der nach den ver-
gleichenden Untersuchungen dieser Autoren die besten Resultate gibt. Der Nahrboden wurde
von uns in Modellversuchen kontrolliert.
Die Diagnose Typhus abdominalis wurde unter Berucksichtigung der klinischen Symptome,
epidemiologischen Angaben and Laboratoriumsbefunde aufgestellt ; hiernach litten 57 der unter-
suchten 76 Kranken wirklich an Typhus. Von diesen waren 7 weniger als 10, 20 Kranke 10-19
and 30 Patienten fiber 20 Jahre alt.
Untersuchungsergebnisse
Zweck unserer Untersuchungen war, wie schon erwahnt wurde, die aus der
Chl.-Behandlung resultierenden Veranderungen der Laboratoriumsbefunde zu
verfolgen. In den auslandischen Mitteilungen, die sich mit den Veranderungen
der WIDALSchen Reaktion beschaftigen, sind die Resultate nicht zusammenge-
faf3t, sondern werden nur allgemein behandelt, Oder man fiihrt die auf jeden
einzelnen Kranken beziiglichen Angaben gesondert an. Wir hielten dieses Ver-
fahren nicht fur geniigend iibersichtlich and waren daher bestrebt, unsere
Ergebnisse nach einheitliehen Gesichtspunkten zusammenzustellen. Zur Aufar-
beitung war es daher unbedingt erforderlich, daf3 uns von den Laboratoriums-
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ergebnissen jedes einzelnen Kranken vom Zeitpunkt vor der Chl.-Behandlung,
mindestens von 3 Untersuchungen wahrend der Behandlung and auch von 2
Untersuchungen nach Beendigung der Therapie Angaben zur Verfiigung
standen. Von diesem Gesichtspunkt waren zur einheitlichen Aufarbeitung des
Materials nur 39 der 57 untersuchten Kranken geeignet. Dies bedeutet jedoch
nicht, da13 wir nicht auch Kranke hatten, bei denen in den einzelnen Perioden
viel mehr Untersuchungen vorgenommen wurden ; neben den in der einheitlichen
Aufarbeitung angefiihrten Patienten wird naturgemaf3 auch von diesen die
Rede sein.
Die Kranken teilten wir in 3 Gruppen ein. In die erste Gruppe (a) nahmen
wir die Kranken auf, bei denen zwischen Beginn der Erkrankung and Chl.-
Behandlung weniger als eine Woche, in die zweite Gruppe (b) jene, bei denen ein
his zwei Wochen, in die dritte (c) diejenigen, bei denen mehr als zwei Wochen
verstrichen waren.
Tabelle I/a enthalt die Ergebnisse der 8 Kranken der ersten Gruppe.
Nur bei 2 Kranken war der Stuhl vor der Behandlung positiv, and bei der
Halfte der Kranken waren, wie zu erwarten war, in der Zeit vor der Behandlung
die Hamokulturen positiv. Die Anzahl der Kranken mit 1 : 100 oder hoherem
H- oder O-Titer war vor, wahrend and nach der Chl.-Behandlung praktisch
unverandert.
Tabelle I/b zeigt die Angaben der 18 Kranken, bei denen zwischen
Krankheitsbeginn and Chl.-Dosierung 1-2 Wochen verstrichen waren.
In dieser Gruppe war bereits der Stuhl bei der Halfte der Kranken positiv,
die Hamokultur hingegen, wie zu erwarten war, nur in 4 Fallen. Die Ziichtbar-
keit des Krankheitserregers aus dem Stuhl wahrend der Behandlung verringerte
sich sehr rasch, and auch hier wurde die.Hamokultur in alien Fallen negativ. Die
Anzahl der Kranken mit bewertbaren H- and O-Titer war praktisch his zuletzt
unverandert.
Die Befunde der 13 Kranken der 3. Gruppe, bei denen seit dem Krankheits-
beginn mehr als 2 Wochen verstrichen. waren, sind auf Tabelle I/c veran-
schaulicht.
Es erscheint auffallend and widersinnig, dab der Krankheitserreger,
obwohl in dieser Gruppe vor Beginn der Behandlung die meisten positiven Stuhl-
befunde hatten festgestellt werden miissen, lediglich bei 3 Kranken aus dem
Stuhl geziichtet werden konnte and gleichzeitig in 2 Fallen bei der Krankenhaus-
aufnahme auch noch positive Hamokulturen beobachtet wurden. Dieses schein-
bar widersprechende Ergebnis kann darauf zuriickzufiihren sein, daB these
Gruppe mehrere Kranke enthielt, die mit Rezidiv aufgenommen wurden. Die
WIDALSChe Reaktion war bei 11 bzw. 8 Kranken beim Titer 1 : 100 oder dariiber
positiv, die Anzahl der H-Titer aufweisenden Kranken praktisch unverandert
and der O-Titer bei jeweils einem Kranken mehr wahrend and nach der Behand-
lung positiv.
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Einfluf3 der seit Krankheitsbeginn bis zum Beginn der Chloramphenicolbehandlung rerstriichenen
Zeit auf die Laboratoriumsbefunde
Tabelle I/a
Seit Ausbruch der Krankheit verstrichene Zeitdauer : 1 Woche.
Anzahl der Kranken : 8
Am 2. 4. 6. 2. 4. Tage
Vor der
Behandlung ,ahrend der Hach der
-- --__- -~ B e h a n d I u n.--.._
g
Stull .....................
HSmokultur ..............
WIDAL 1/100 oder hoherer
Titer
>H< .................
>O< .................
2 1 2
4 1
5 5 5 5 6
5 5 6 7 6
Tabelle I/b
Seit Ausbruch der Krankheit verstrichene Zeitdauer: 1-2 Wochen.
Anzahl der Kranken : 18
Am 2. 4. 6. 2. 4. Tage
Vor der ~.. -. -- - _ ------ - - _-___-_ -_
Behandlung ahrend der nach der
__-Behandlung
Anzahl der Kranken mit positivem Befund
Stull ..................... 9 6 2 2 2 1 3
Hamokultur .............. . 4 2 1
WIDAL 1/100 oder hoherer
Titer
>Ha ................. 12 11 12 15 12 9
>O< ................. 13 12 15 17 13 9
Tabelle I/c
Seit Ausbruch der Krankheit verstrichene Zeitdauer : mehr als 2 Wochen.
Anzahl der Kranken : 13
tIntereuchung Behandlung wdhrend der
It ehand lung
Stuhl .....................
Hiirnokultur ..............
WIDAL 1/100 oder hoherer
Titer
>H< .................
>O< .................
Anzahl der Kranken mit positivem Befund
1 1 1
nach der
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OBER DIE BEWERTUNG DER LABORATORIUMSUNTERSUCHUNGSRESULTATE 257
Die Entwicklung der WJDALSChen Titer and ihre geometrischen Mittel-
werte bei den 3 Gruppen ergeben sich aus Abb. 1.
Wie aus Abb. 1 hervorgeht, sind die H-Titer hoher als die O-Titer.
Auffallenderweise sind die H-Titer der ersten Gruppe hoher als die der zweiten,
doch handelt es sich letzten Endes nur um eine Verdiinnungsdifferenz, d. h.
um den Titer 1 :200 oder 1 : 400, so daB die Abweichung nicht signifikant sein
Titer Reagenzglaser
1:1600 51
C/ 0 7/ H
b1H
alo, 0/0
border Wd'hrendder Nachder
Beixand/ung Behandlung Behandlung
am 2. 4. 6. 2. 4.Tage
Abb. 1. Entwicklung der durchschnittlichen WIDALschen Titer nach Krankengruppen
kann. Wie zu erwarten war, fanden wir die hochsten H-Titer im Blutserum der
dritten Gruppe, d. h. bei den Kranken, die nach der langsten Periode ohne
Behandlung ins Krankenhaus aufgenommen wurden. Die O-Titer der drei
Gruppen zeigen ahnlichen Verlauf, keiner steigt fiber den Wert 1 :200. Nach
Abb. 1 besteht demnach in der Entwicklurg der O-Agglutinine, in welcher
Krankheitsperiode die Chl.-Behandlung auch immer begonnen wurde, kein
wesentlicher Unterschied. Im Verhaltnis zu den Ausgangswerten konnen wir
bei den H-Titern hoehstens auf eine einer Verdfinnungsdifferenz entsprechenden
Erhohung rechnen. Auch der O-Titer verhalt sich ahnlich and weist am 4. oder
6. Tage der Therapie geringe Erhohung auf, was bei der iiblichen Methodik
moglicherweise gar nicht wahrgenommen wird.
Bei den bisher mitgeteilten Angaben handelt es sich, wie bereits erwahnt
wurde, um Durchschnittswerte. Wir halten es deshalb fur notig, uns mit den
Kranken der einzelnen Gruppen noch eingehender zu befassen.
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Bei der ersten Gruppe (a) wurden in Wirklichkeit nicht 8, sondern 11
Kranke untersucht. Bei 5 konnten aus dem Stuhl weder wahrend noch nach der
Behandlung jemals Typhusbazillen gezuchtet werden ; indessen befand sich in
dieser Gruppe Pin Kranker, aus dessen Stuhl der Erreger 8mal gezuchtet wurde.
Der H-Titer von 4 Kranken stieg auf 1 : 800 oder dariiber hinaus, bei 3 Kranken
ergab der O-Titer ein-zweimal 1 : 800 ; diese Beobachtung batten wir nicht ma-
chen konnen, wenn wir - wie in der Praxis iiblich-die Untersuchungen wochent-
lich einmal vorgenommen batten. Demgegenuber bestand bei 3 Kranken wah-
rend der ganzen Untersuchungsdauer niemals auch nur ein H- oder O-Titer
von 1 : 100. Die hochsten H- and O-Titer sahen wir bei dem Kranken, bei dem
der Krankheitserreger 8mal aus dem Stuhl gezuchtet werden konnte.
In der zweiten Gruppe (b) vermochten wir die Befunde von samtlichen 18
Kranken aufzuarbeiten. Wie schon aus der Tabelle hervorgeht, konnte der Krank-
heitserreger aus dem Stull von 9 Kranken niemals kultiviert werden. Dagegen
beobachteten wir einen Kranken, aus dessen Stuhl Typhusbazillen bei 22 von
28 Untersuchungen gezuchtet werden konnten ; gleichzeitig stieg der H-Titer
dieses Kranken bis zu 1 : 3200, der O-Titer his 1 : 800. Bei einem anderen Kran-
ken liel3 sich der Erreger bei 17 von 25 Untersuchungen ziichten. In diesem Fall
war jedoch keine Erhohung der H- and O-Titer festzustellen. Auch in dieser
Gruppe gab es zwei Kranke, bei denen kein bzw. nach mehrmaliger Untersu-
chung jeweils einmal ein H- oder O-Titer 1 : 100 festgestellt wurde.
Die dritte Gruppe (c) enthielt in Wirklichkeit 24 Kranke, doch waren im
Hinblick auf die vorhin erwahnten Gesichtspunkte nur die Befunde von 13 zur
Aufarbeitung geeignet. Dies war die am wenigsten einheitliche Gruppe, da es
sich ja um Kranke mit 14-30tagiger Anamnese handelte. Aus dem Stuhl von
14 Kranken konnten wir den Krankheitserreger niemals zuchten, hingegen war
die Hamokultur bei 4 Kranken vor der Behandlung positiv. Wahrend des Kran-
kenhausaufenthalts wurde die Hamokultur noch bei weiteren 5 Kranken positiv.
Die positive Hamokultur wahrend oder nach der Behandlung stellten wir in 3
Fallen gleichzeitig mit dem Auftreten neuer klinischer Symptome, vor allem dem
Erscheinen des Fiebers, d. h. eines Rezidivs fest, doch sei interessanterweise
bemerkt, daB wir positive Hamokulturen in 2 Fallen am Ende der 4. Krankheits-
woche sahen and diese nicht von klinischen Symptomen begleitet waren. Bei
einem Kranken war dies der einzige positive bakteriologische Befund wahrend
der ganzen Krankheitsdauer, obwohl die WIDALSChe Reaktion bereits bei der
Aufnahme einen O-Titer von 1 : 1600 ergab. Im Laufe der Behandlung sank
dieser Titer sodann. Wahrend der ganzen Untersuchungsperiode beobachteten
wir bei den 57 Kranken insgesamt 8 Rezidive. Diese Zahl ist nicht als hoch zu
bezeichnen ; verschiedene Autoren beobachteten wahrend der Chi.-Therapie im
allgemeinen mehr Rezidive.
4 Kranke wurden ins Krankenhaus mit positivem bakteriologischen
Befund, aber bereits symptomfrei aufgenommen ; diesen verabreichten wir
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kein Chl., so daB sie in unserer Statistik nicht berucksichtigt werden konnten.
Ihre Anzahl ist jedoch so gering, daB sie gegeniiber den Behandelten keine
Vergleichsgrundlage bieten.
Wie bereits einleitend erwahnt, wurden die Hamokulturen 6 Tage inkubiert
and auf Brillantgriin-Nahrboden iibertragen. Die Ergebnisse dieser Unter-
suchungen sind in Tabelle II zusammengefaBt.
Tabelle II
Anzahl der positiven Hamokulturen nach der Inkubationsdauer
Inkubationsdauer
in Tagen
Wie aus Tab. II hervorgeht, waren 7 der 30 positiven Hamokulturen ver-
lorengegangen, wenn wir die Kulturen nicht 4 Tage fang inkubiert hatten ;
eine weitere positive Hamokultur gewannen wir am 6. Tage. Auf Grund dieses
Befundes erscheint es unbedingt angezeigt, daB wir uns nicht mit 2tagiger
Inkubation begniigen, sondern die Hamokulturen mindestens an 4 aufeinander-
folgenden Tagen inkubieren lassen.
Die bei Anwendung des anreichernden Nahrbodens gewonnenen Resultate
sind auf Tabelle III wiedergegeben.
Tabelle III
Durch unmittelbare Untersuchung and mit dem Anreicherungsverfahren geivonnene
positive Ziichtungsergebnisse
Unmittelbare
Untersuchmmg i Anreicherung
Wir gewannen insgesamt 91 positive Zuchtungsergebnisse. In 19 dieser
Falle konnten die Typhusbazillen nur bei Anwendung des anreichernden Nahr-
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bodens geziichtet werden. Die Anreicherung wird in unserer Abteilung seit
einiger Zeit auch routinemaBig bei der Aufarbeitung der mit der Bezeichnung
>Bazillenwirt< bzw. >krank ~e,etG: Remit Georg,
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